Тема: Мои микрофото (Прочитано 4236 раз)

LifeIsGood · « : 22 Травня 2011, 00:22:53 »

Решил для своего удобства создать отдельную тему

Первое фото - фотография бактерий на клете эпителия щеки.
Снято 5 кадров и сложено в CombineZM
Камера 8Мп QHY8
Микроскоп AmScope 490B
Объектив CZJ 40/0.95/0.17
Мазок зафиксирован в пламени горелки. Окраска по романовскому, но есть подозрение, что вода не совсем подходит. Нет индикаторной бумаги, чтобы проверить.
Выводы: Большой размер пикселя не позволяет полностью использовать разрешающую способность объектива микроскопа. Есть вопросы с цветопередачей.

LifeIsGood

Вторая попытка была с использованием фотоаппарата Canon 550D. Управляя камерой в режиме Live View очень удобно фокусироваться, а 15 Мп (при том же размере приемника) матрица позволяет избежать undersampling (не знаю как перевести).
Окраска таже. Разбавленным раствором азура-эозина (1 капля на 1мл воды). Контраст довольно низкий.

LifeIsGood

Теперь окраска материала со щеки метиленовым синим. Капля 1% расвора на высушенный и зафиксированный в пламени горелки мазок. Накрываем покровным стеклышком и с помощью фильтровальной бумаги вытягиваем краску, добавляя по чуть-чуть дистиллированной воды с другой стороны стекла.
Результат: В клетках и ядрах много чего видно, появились лейкоциты (нейтрофилы и эозинофилы?) Но все синее

Контраст хороший.

LifeIsGood

Просто симпатичная клеточка

LifeIsGood

Теперь пошкреб ложкой гланды.
Окрасил азур-эозином по романовскому, но чуть-чуть по-другому.
Налил неразбавленную краску на высушенный мазок. Подождал две минуты (по идее метиловый спирт зафиксировал клетки), добавил воды из расчета 2 капли краски на 1 мл раствора. Подождал 30 минут. Результат довольно расочный но с сильным доминированием оттенков красного. Бактерии как всегда синие
Большая картинка тут:
http://sakva.net/gallery_ru/?album=2&gallery=7&pid=17

LifeIsGood

Другой фрагмет. Красивая клетка по центру похожа на лейкоцит.
бОльшая версия тут:
http://sakva.net/gallery_ru/?album=2&gallery=7&pid=18

LifeIsGood

Понравилась колония бактерий.
http://sakva.net/gallery_ru/?album=2&gallery=7&pid=19

MaxMan

Клёва ваще!!!!!!

а какие объективы использовались?.... подробнее о параметрах съёмки плииизззз.

LifeIsGood

Дык нет особо никаких параметров. Снималось в основном по паре кадров без перефокусировки - для уменьшения шумов.
Снимал на Canon 550D. Фокусировка в режиме лайв вью.
Пробовал на КХУ8, но там сильно не хватает разрешения. Слишком пикселы большие.
Объектив CZJ 40/0.95/0.17/160

MaxMan

это который с масляной иммерсией?

LifeIsGood

Неее... сухой! Сухой как лист

ajgolink

Во

!!!!!!! Можно подробней про контраст, плиз.

LifeIsGood

А что именно интересует (про контраст)?
Подозреваю, что из-за того, что у меня не расчетное расстояние между камерой и объективом у меня вылазит сильная сферическая аберрация. Надо это исправить, но пока не решил как.

OlegBr

Очень интересные фото

Денис, спасибо за то, что открываешь нам микромир!

LifeIsGood

Тестирование объектива микроскопа по сферической аберрации или насколько важна правильная толщина покровного стекла (а так же расстояние от объектива до приемника)
Вот тут на видео видно как меняется качество картинки в зависимости от того какую толщину покровного стекла я выбираю на пояске объектива от 0.12мм до 0.20.
Т.е. разница в толщине всего лишь в 0.08мм имеет такой драматический эффект.

Сферическую аберрацию можно внести несколькими способами:
- Неверно выставить расстояние до матрицы
- Неверная установка толщины покровного стекла
- Неправильный выбор иммерсионной жидкости

Shadow

так неправильное стекло установлено или настройка на объективе ?

LifeIsGood

Поясок на объективе позволяет подбирать толщину покровного стекла. Т.е. тут ничего не меняется кроме коррекции оъектива.

Shadow

интересно.. там какое-то зуммирование внутри объектива есть?

LifeIsGood

Там не зум в прямом смысле слова. Там двигается блок линз, который вызывает разную сферическую аберрацию. Обычно расчетная толщина покровного стекла 0.17мм. Отклонения от расчетной величины ведут к сферичке (положительной или отрицательной). Эту сферичку объектив и компенсирует.

Shadow

Цитата: LifeIsGood від 31 Травня 2011, 20:33:18

Там не зум в прямом смысле слова. Там двигается блок линз, который вызывает разную сферическую аберрацию. Обычно расчетная толщина покровного стекла 0.17мм. Отклонения от расчетной величины ведут к сферичке (положительной или отрицательной). Эту сферичку объектив и компенсирует.

спасибо за пояснение. примерно понял.

Новини:

Автор Тема: Мои микрофото (Прочитано 4236 раз)